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肿瘤新抗原肽诱导献血者PBMC特异反应性T细胞
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杨颖, 路丽明, 李勤, 郭忠慧, 杨启修, 张嘉敏, 赵俸涌, 王晨, 朱自严
临床输血与检验
2022, 24 (5):
565-573.
DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2022.05.004
目的 观察异基因献血者来源PBMC(peripheral blood mononuclear cells)是否可被来自于肿瘤患者测序来源的新抗原肽诱导为特异反应性T细胞。
方法 取健康献血者新鲜外周血白膜层,分离获得PBMC后,粘附获得单核细胞,同时冻存PBL(peripheral blood lymphocytes)。单核细胞以每三天加入细胞因子GM-CSF和IL-4进行细胞诱导培养,7天后收获成熟DC(dendritic cells),24孔铺板后分别装载16条肿瘤新抗原肽,其中13条为本项目组前期研究所得,5 h后加入4~10倍细胞数量已复苏的PBL共培养,每三天加入IL-2,对照为不加抗原肽(DC/PBL),加入PHA(Phytohemagglutinin,植物血凝素)PBL孔作为阳性对照;第14天、第21天分别再行新抗原肽脉冲刺激,第22天留取上清液用ELISA方法测量IFN-γ浓度,剩余细胞用流式细胞仪分析CD3
+IFN-γ
+/CD8
+IFN-γ
+T细胞占比。
结果 发现10/13中的每条多肽至少可诱导3份PBL分化为分泌IFN-γ反应性CD3
+或CD8
+T细胞,同步ELISA测得上清液中IFN-γ浓度也升高,以上结果具有一定的相关性(CD3
+或CD8
+T细胞r值分别为0.66、0.58,P<0.05)。
结论 我们成功地建立了用来自肿瘤患者的肿瘤新抗原肽诱导健康献血者的PBMC分化为肿瘤新抗原肽特异性的T细胞。
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