摘要： 目的 本课题旨在研究姜黄素（CUR）联合美罗培南（MEM）对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌（CRPA）MexAB-OprM外排泵过表达的抑制作用。方法 微量肉汤法检测MEM的MIC,并通过MIC逆转倍数筛选出外排泵高表达的菌株;微量肉汤检测CUR的MIC;棋盘滴定法测定MEM和CUR的最佳联合浓度;PCR技术检测7株菌的mexA、mexB、oprM和mexR、nalC、nalD基因;qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因的表达水平;利用260 nm处吸光度检测细菌细胞膜的完整性;溴化乙锭（EB）荧光累积和直接外排含量来观察MexAB-OprM外排泵的表达;qRT-PCR技术检测CUR-MEM联合和MEM单药处理细菌24 h后mexA、mexB、oprM基因和调控基因mexR、nalC、nalD的表达水平。结果 30株CRPA筛选出7株外排泵MexAB-OprM高表达的菌株;微量肉汤法确定CUR的MIC为512~1 024 μg/mL;棋盘滴定法发现CUR显著降低了MEM的MIC值,两者有明显的协同作用,FIC指数为≤0.5;PCR技术均检测到mexA、mexB、oprM、mexR、nalC、nalD基因。qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因,发现PA21号菌株外排泵表达水平远高于其他6菌株;OD260 nm吸光度检测实验发现128 μg/mL的CUR没有破坏细胞膜的完整性,256和512 μg/mL的CUR浓度能不同程度的破坏细胞膜;CUR单药组EB细胞内荧光累计百分比为11.2%、MEM单药组6.4%、CUR-MEM联合组为22.2%;与单药组相比,联合组差异有统计学意义（P<0.01,F=19.12）;直接EB外排实验发现EB含量的变化：CUR单药组降低10.6%,MEM单药组降低15.7%,药物联合组降低7.1%;qRT-PCR实验发现,药物联合组mexA、mexB、oprM基因与CUR组相比分别降低41.62%、39.57%、59.78%,与MEM单药组相比分别降低53.5%、48.44%、63.09%,差异有统计学意义（P<0.05,F=13.24,F=27.07,F=213.50）;qRT-PCR实验发现药物联合组的调控基因mexR与MEM组相比升高22.9%,差异具有统计学意义（P<0.05,F=9.64）,nalC与MEM组相比分别降低77.54%,差异具有统计学意义（P<0.001,F=46.21）,nalD与CUR单药组相比降低69.62%,与MEM组相比分别降低76.29%,差异具有统计学意义（P<0.001,F=66.41）。结论 CUR联合MEM可以抑制MexAB-OprM外排泵的过表达,CUR与MEM以浓度依赖性方式发挥协同作用。

关键词: 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌, 姜黄素, 美罗培南, MexAB-OprM外排泵

中图分类号: 

• R378