临床输血与检验 ›› 2016, Vol. 18 ›› Issue (3): 258-261.DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2016.03.019
姬长甫, 尹惠琼, 贾俊婷, 王蕊, 朱凤宣, 杨姝, 章金刚
JI Chang-fu, YIN Hui-qiong, JIA Jun-ting, et al
摘要: 目的建立条形码DNA实时荧光定量PCR(qPCR)的定量方法,为人源血液病毒蛋白的新型BCA检测奠定基础。方法在新型BCA检测中,设计并合成了一段条形码DNA序列及其引物和探针序列。将条形码DNA克隆入pMD-18T载体,构建条形码DNA参考品质粒。优化条形码DNA qPCR检测体系的重要反应参数,以一系列梯度稀释的条形码DNA参考品质粒为模板,建立qPCR标准曲线,对建立的条形码DNA qPCR定量方法进行敏感性和重复性评价。结果获得了一段特异的条形码DNA序列并构建其参考品质粒,建立了条形码DNA qPCR的定量方法,检测标准曲线在(109~102) copies/μl模板浓度范围内线性关系良好,检测灵敏度达100 copies/μl,组内重复的变异系数均小于10%,组间重复的变异系数范围4.42 %~39.05%。结论建立的基于实时荧光定量PCR的条形码DNA定量方法具有较高的灵敏度和良好的重复性,可用于人源血液病毒蛋白的新型BCA检测体系。
中图分类号: